Ag43/GFP 嵌合表达质粒的构建及其在大肠杆菌表面的表达
目的:构建大肠杆菌抗原Ag43(pETAg43′)以及Ag43和绿色荧光蛋白(GFP)(pETAg43′/GFP)的重组表达质粒,了解pETAg43′/GFP是否能够将GFP表达于细菌表面。方法用PCR扩增获得Ag43大部分基因序列( Ag43′),同时用酶切方法从质粒pEGFP-C1切取GFP基因序列,首先将Ag43′基因序列插入表达质粒pET-22b中,获得重组质粒pETAg43′,然后再将GFP基因序列插入pETAg43′获得质粒pETAg43′/GFP。将重组质粒pETAg43′/GFP转化Ag43基因缺失的菌株JM109(△Ag43),用荧光显微镜和SDS-PAGE了解是否能将GFP表达于细菌表面,同时了解加热是否能够直接获得Ag43′/GFP的嵌合重组蛋白。结果琼脂糖凝胶电泳发现PCR扩增的Ag43′和GFP基因序列分子量大小与预期值相一致,酶切分析重组质粒pETAg43′和pETAg43′/GFP结果与预期值相符,基因测序显示质粒pETAg43′和pETAg43′/GFP的基因序列和阅读框架均准确无误。质粒pETAg43′/GFP经诱导后可以将Ag43′/GFP嵌合蛋白表达于大肠杆菌JM109(△Ag43)的表面,55℃加热50 min是提取Ag43′/GFP嵌合蛋白的最佳条件。结论成功构建了能够将外源蛋白GFP表达于细菌表面的重组表达载体,在大肠杆菌表面有效表达并加热提取获得了嵌合重组蛋白Ag43′/GFP,为制备其他自身抗原分子的Ag43嵌合蛋白奠定了基础。
抗原Ag43、绿色荧光蛋白、嵌合重组蛋白质、重组表达质粒、细菌表面表达
S85;R37
国家自然科学基金资助项目编号81272477;海南省自然科学基金资助项目编号812198
2015-04-07(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
共5页
517-520,521