稳定表达人CCL17基因的肝癌细胞系的建立及CCL17活化T淋巴细胞功能的初步鉴定

摘要：

目的 建立稳定表达人CCL17基因的肝癌细胞系并初步验证CCL17活化T淋巴细胞的抗肿瘤功能.方法 分离肝癌患者腹腔液单个核细胞及淋巴细胞,提取单个核细胞总RNA,RT-PCR扩增CCL17基因,经克隆测序后将CCL17插入真核表达载体pCDNA3.1(-);将真核表达质粒转染肝癌细胞系BEL-7402细胞,利用G418筛选抗性单克隆细胞株,Western blot检测细胞培养上清中CCL17的表达水平;用含CCL17的培养上清液刺激腹腔液来源淋巴细胞后,再与BEL-7402细胞共孵育,利用Annexin V/PI凋亡检测试剂盒检测肿瘤细胞凋亡率,倒置相差显微镜观察肿瘤细胞形态学改变.结果 成功克隆出CCL17基因全长序列,并构建了真核表达质粒pCDNA3.1(-)-CCL17;质粒转染BEL-7402细胞后经G418筛选获得5个抗性单克隆细胞株,Western blot结果显示5株细胞培养上清液中均有CCL17表达,其中克隆株F9、F11和G8表达量较高;与对照组比较,含CCL17培养上清液刺激后的腹腔液淋巴细胞,能诱导BEL-7402细胞发生显著凋亡样改变.结论 成功构建了稳定表达人CCL17基因的肝癌细胞系,并初步证实含CCL17的细胞培养上清液有活化T淋巴细胞,促进杀伤肿瘤的作用.

关键词：CCL17、肝癌细胞系、稳定转染、T淋巴细胞

所属期刊栏目：33

分类号：I20;I2

资助基金：国家"重大新药创制"科技重大专项资助项目2009ZX09103-708;国家自然科学基金资助项目31100664;广东省自然科学基金面上项目10151022401000024

在线出版日期：2012-12-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：3217-3219