MS-HRM检测游离甲基化SEPT9在结直肠癌早期诊断中的应用

摘要：

目的 建立一种稳定的甲基化敏感高分辨率熔解曲线(MS-HRM)定量检测血浆游离甲基化SEPT9的方法,并初步探讨利用此方法进行结直肠癌早期诊断的可行性.方法 按照不同比例混合甲基化和未甲基化DNA建立标准品,复管反应作出标准熔解曲线,定量检测36例结直肠癌患者血浆样本和20例正常人血浆样本甲基化SEPT9,并与Methylight进行比较.梯度稀释其中1例结直肠癌血浆游离DNA,分析其甲基化程度与DNA量是否独立.随机取2例结直肠癌样本重复甲基化修饰至MS-HRM分析,以排除修饰不完全对实验结果的影响.结果 SEPT9 MS-HRM法可检出混合甲样本中1%的甲基化,其检测灵敏度达1%.36例结直肠癌患者血浆中检测到25例(69.44%)有不同程度SEPT9基因甲基化,20例正常人血浆样本有2例(10%)呈现1%～5%甲基化.不同DNA量甲基化程度恒定,初步确定检测范围可达皮克级DNA.2例独立重复检测样本检测结果基本符合初次实验结果.结论 MS-HRM法检测游离的甲基化SEPT9简单易行,快速,稳定,敏感性高,检测样本范围广,有望为结直肠癌筛查开拓一个新平台.

关键词：结直肠癌、SEPT9、甲基化、高分辨率熔解曲线、MS-HRM

所属期刊栏目：33

分类号：R51;R73

资助基金：广州市科技计划项目2008A1-E4151

在线出版日期：2012-08-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：1732-1734