重组腺病毒Ad-P2G-DCN的构建及在HEK-293细胞中的表达

摘要：

目的 制备表达基质细胞衍生因子(SDF-1)拮抗剂P2G与饰胶蛋白聚糖(decorin,DCN)嵌合基因的重组腺病毒,并检测其在HEK-293细胞中的表达情况.方法 以前期构建的pET-30a+/P2G-DCN为模板,PCR扩增目的 基因P2G-DCN,并克隆到穿梭质粒pAdTrack-CMV;然后将化学合成的SDF-1信号肽序列插入P2G-DCN的5′端,构建为重组穿梭质粒pAdTrack-CMV/SP-P2G-DCN;经PmeⅠ酶切线性化,与骨架质粒pAdEasy-1在大肠杆菌BJ5183中进行同源重组,筛选重组腺病毒质粒pAd-SP-P2G-DCN.PacⅠ酶切线性化的pAd-SP-P2G-DCN通过脂质体介导转染人胚肾转化细胞系HEK-293,包装并扩增重组腺病毒Ad-P2G-DCN.荧光计数确定病毒感染滴度,并以Western blot法检测嵌合蛋白P2G-DCN在HEK-293细胞中的表达情况.结果 构建了携带P2G-DCN基因的重组腺病毒,该重组腺病毒感染HEK-293细胞后可高效分泌表达重组嵌合蛋白P2G-DCN.结论 成功构建了重组腺病毒Ad-P2G-DCN,为后续系统研究Ad-P2G-DCN在肿瘤基因治疗中的作用奠定了实验基础.

关键词：基质细胞衍生因子、饰胶蛋白聚糖、腺病毒载体

所属期刊栏目：33

分类号：R73;R97

资助基金：国家自然科学基金资助项目81101732;高等学校博士学科点专项科研基金资助项目20104433120013

在线出版日期：2012-05-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：1097-1100