E2F-1截短体的诱饵载体的构建及检测

摘要：

目的 构建E2F-1截短体的诱饵载体,并进行自激活活性和诱饵蛋白毒性检测,为应用酵母双杂交系统筛选与E2F-1相互作用蛋白建立实验基础.方法 设计引物,PCR扩增E2F-1截短体,引入酶切位点EcoR Ⅰ和BamH Ⅰ,将E2F-1截短体连接至载体pGBKT7中,将构建成功的诱饵表达载体pGBKT7-E2F-1截短体转化到酵母菌AH 109中,采用选择性培养皿和β-半乳糖苷酶分析等方法分析检测重组质粒的自激活活性和细胞毒性.结果 成功扩增了E2F-1截短体,并连接至载体pGBKT7中,测序比对结果正确,成功转化到酵母菌AH 109中,经检测无自激活活性和细胞毒性.结论 成功构建了E2F-1截短体的诱饵载体,经检测无自激活活性和细胞毒性,可应用于酵母双杂交系统筛选与E2F-1相互作用的蛋白.

关键词：E2F-1截短体、诱饵表达载体、酵母双杂交、自激活

所属期刊栏目：32

分类号：R39;R73

资助基金：国家自然科学基金资助项目30860273;广西科学研究与技术开发计划项目桂科攻10124001A-22;广西医疗卫生重点科研项目桂卫重200912

在线出版日期：2011-11-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：2635-2637