破伤风毒素C片段在乳链菌内的表达

摘要：

目的 构建破伤风毒素C片段(TETC)乳链菌表达载体,并验证其生物活性.方法 将采用基因拼接方法 获得的TETC基因从测序正确的质粒pBS-TETC上以Sal Ⅰ、Hind Ⅲ切下,分别定向连接到以Xho Ⅰ、Hind Ⅲ 酶切的质粒分泌表达的乳链菌表达载体pNBC1000和膜锚定表达的乳链菌表达载体pNBC2000.电穿孔转化乳链菌,分别提取分泌蛋白及膜锚定蛋白,通过蛋白电泳及Western blot检测蛋白定位表达情况.结果 构建了分泌表达及锚定表达TETC的乳链菌表达载体pNBCL1002与pNBCL2002,电穿孔转化乳链菌获得了分泌表达及膜锚定表达TETC的乳链菌,SDS-PAGE分析显示分泌表达的TETC大小约为57.8 kD,表达量占总体蛋白的8.06%、上清蛋白的9.82%,锚定表达的TETC大小约为73.5 kD的表达蛋白,表达量占总体蛋白的10.7%、膜蛋白的17.9%; Western blot检测显示所表达的TETC均可与破伤风抗毒素血清发生免疫印迹.结论 成功构建了TETC乳链菌表达载体并在乳链菌内表达TETC,初步验证了表达的TETC的免疫反应性,这一结果 可能为进一步研究生物佐剂及防治破伤风疫苗奠定基础.

关键词：破伤风毒素C片段、乳链菌、生物佐剂、疫苗

所属期刊栏目：32

分类号：TQ4;R39

资助基金：国家自然科学基金自由申请面上项目30570839;广东省自然科学基金资助项目05004735;广东省教育部产学研结合项目2009B090300354

在线出版日期：2011-08-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：1644-1647