PET32a-CDK2重组质粒的构建与表达

摘要：

目的 构建含有细胞周期依赖性激酶2(CDK2)的PET32a-CDK2重组质粒,利用原核表达体系表达CDK2蛋白.方法 从人白细胞中提取总RNA, 采用聚合酶链反应从总RNA中扩增出CDK2基因,并将其插入PET32a质粒,构建重组质粒,化学法转化大肠杆菌DH5α进行克隆.将克隆得到的PET32a-CDK2重组质粒转化入表达菌株BL21,通过异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导其蛋白表达,SDS-PAGE和Western-Blot鉴定蛋白表达情况.结果 菌落PCR及DNA测序证实CDK2基因已正确克隆到载体中;重组质粒成功转入表达菌株BL21(DE3),SDS-PAGE和Western-Blot结果显示表达菌经IPTG诱导后表达出52 kD左右的蛋白.结论 成功构建重组质粒,并且CDK2全长蛋白在原核表达菌BL21中成功表达.

关键词：CDK2、重组质粒、原核表达

所属期刊栏目：32

分类号：R68;R73

资助基金：广东省自然科学基金资助项目10151040701000031,07004832;广东省科技计划项目2010B060900069

在线出版日期：2011-05-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：681-684