VEGF真核表达载体构建及其转染骨髓间充质干细胞的表达

摘要：

目的 构建大鼠血管内皮细胞生长因子164(vascular endothelial growth factor,VEGF164)真核表达载体pcDNA3.1(-)/VEGF164,观察大鼠骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)转染pcDNA3.1(-)/VEGF164基因后,外源性基因VEGF在蛋白水平的表达,为其在治疗肺组织损伤中的应用奠定基础.方法 应用DNA重组技术构建VEGF164真核表达载体.采用脂质体介导的转染方法将pcDNA3.1(-)/VEGF164转染大鼠MSCs,并设立空质粒对照组(转染pcDNA3.1空载体)、脂质体对照组,用细胞免疫组化和Western blot检测大鼠MSCs 中VEGF164蛋白的表达情况.结果 重组质粒pcDNA3.1(-)/VEGF164测序结果与基因库(GENEBANK)中序列一致.细胞免疫组化检测显示pcDNA3.1(-)/VEGF164转染组MSCs中可见散在黄色颗粒,而空质粒对照组和脂质体对照组均未见明显黄色颗粒.Western blot检测pcDNA3.1(-)/VEGF164转染MSCs 72 h后,细胞裂解产物中VEGF含量明显高于空质粒对照组和脂质体对照组.结论 成功构建了大鼠VEGF164真核表达载体,实现VEGF164基因在大鼠MSCs的成功转染,并有外源性基因及蛋白的表达,具有促进肺组织损伤修复的应用前景.

关键词：血管内皮细胞生长因子、真核表达载体、转染、骨髓间充质干细胞

所属期刊栏目：32

分类号：R78;R52

资助基金：广东省科技计划项目2008B030301151

在线出版日期：2011-03-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：21-24