人泛素偶联酶UBE2C/UbcH10基因的克隆、原核表达载体的构建及表达

摘要：

目的 获取泛素偶联酶家族成员之一的UBE2C/UbcH10的基因,构建具有His标签的原核表达载体,在大肠杆菌中表达UBE2C/UbcH10蛋白.方法 利用RT-PCR的方法 从肝癌细胞HepG2中获得UbcH10的基因,克隆到pMD-19T载体中并测序鉴定,酶切回收后插入原核表达载体pET32a(+)中,构建重组表达载体pET32a-UbcH10,转化大肠杆菌BL21,经IPTG诱导表达.结果 重组表达载体pET32a-UbcH10在大肠杆菌BL21中经IPTG诱导4h获得稳定高效的融合表达.重组蛋白以可溶形式存在,大小在29.0 kD左右.结论 UbcH10重组表达载体的成功构建以及重组蛋白的表达,为进一步其结构和功能的研究奠定了基础,有望揭示该蛋白在癌症发生发展过程中的作用.

关键词：泛素偶联酶、原核表达载体、构建、表达

所属期刊栏目：30

分类号：R73;S81

资助基金：国家高技术研究发展计划863资助项目2006AA02A311

在线出版日期：2009-06-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：698-700