实时荧光定量PCR方法检测急性髓系白血病FLT3基因mRNA的表达

摘要：

目的 构建检测急性髓细胞白血病FLT3基因mRNA表达的标准品重组质粒和荧光定量PCR方法,为进一步研究FLT3基因表达与急性髓细胞白血病的关系奠定基础.方法 利用引物设计软件设计出扩增FLT-3基因的引物和特异性荧光探针,提取K562细胞株总RNA,经RT-PCR扩增,产物纯化后与pUCm-T Vector连接,转化到大肠杆菌DH5α,筛选得到标准品的质粒FLT3P.建立荧光定量PCR检测FLT3基因技术方法,建立标准曲线并检测15例初治AML患者.结果 重组质粒进行荧光定量PCR扩增出现强烈的荧光值增长,表明FLT3 cDNA已成功克隆.以106～102copies/μl不同稀释水平的标准品进行荧光定量PCR扩增,所获得的Ct值与标准品浓度的对数存在良好线性关系,标准曲线回归系数为0.9998.AML病例FLT3表达水平显著高于正常对照组(P=0.017),且不同病例的表达水平存在较大差异.结论 成功构建用于定量检测FLT3 mRNA表达的荧光定量PCR标准品和技术方法;AML病例FLT3表达水平显著增高.,建立标准曲线并检测15例初治AML患者.结果 重组质粒进行荧光定量PCR扩增出现强烈的荧光值增长表明FLT3 cDNA已成功克隆.以106～102copies/μl不同稀释水平的标准品进行荧光定量PCR扩增,所获得的Ct值与标准品浓度的对数存在良好线性关系,标准曲线回归系数为0.9998.AML病例FLT3表达水平显著高于正常对照组(P=0.017),且不同病例的表达水平存在较大差异.结论 成功构建用于定量检测FLT3 mRNA表达的荧光定量PCR标准品和技术方法;AML病例FLT3表达水平显著增高.,建立标准曲线并检测15例初治AML患者.结果 重组质粒进行荧光定量PCR扩增出现强烈的

关键词：白血病、髓细胞、急性、基因、FLT3、PCR、实时定量

所属期刊栏目：29

分类号：R73(肿瘤学)

资助基金：广东省科技计划2004B30701005

在线出版日期：2008-05-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：377-379