10.3969/j.issn.1001-9448.2007.09.020
结核分支杆菌LprG基因的克隆、表达及纯化
目的 在大肠杆菌中重组表达MTB LprG基因,纯化回收,为进一步研究其在结核病诊断中的价值奠定基础.方法 从MTB H37Pv基因组中PCR扩增出MTB LprG基因,克隆到pEASY T1载体中,经序列测定后,再亚克隆到表达载体pET28a(+)中,转化入E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达,Western-blot分析鉴定,采用Ni-NTA柱纯代LprG蛋白.结果 扩增产物序列无突变,重组表达载体pET28a(+)-LprG酶切鉴定正确,LprG蛋白在E.coli BL21(DE3)中的表达量约占菌体总蛋白的38%左右,主要以可溶性形式存在,Western-blot分析在27 kDa处见到目的蛋白条带,经Ni-NTA柱纯化后,得到纯度较高的该蛋白.结论 构建了LprG基因的重组表达载体,获得了纯化的蛋白,为以后研究奠定了基础.
结核分支杆菌(MTB)、LprG基因、克隆、表达、纯化
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R3(基础医学)
2007-10-12(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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