结核分支杆菌Ag85B蛋白在大肠杆菌中的高效表达

摘要：

目的通过结核分支杆菌Ag85B基因在大肠杆菌中的表达,获得大量纯化的重组Ag85B(rAg85B)蛋白.方法应用PCR技术扩增结核分支杆菌H37RvAg85B DNA序列;以质粒pET24b为表达载体,构建Ag85B重组质粒,然后转化大肠杆菌BL21(DE3);以IPTG诱导转化子,通过SDS-PAGE电泳鉴定rAg85B的表达水平,采用Novagen公司生产的His.Bind蛋白纯化试剂盒纯化rAg85B蛋白.结果重组质粒pET24b-Ag85B测序表明与报道的序列相同.它在大肠杆菌BL21(DE3)细胞内以包涵体形式存在,表达量占菌体总蛋白的30%左右.纯化后的rAg85B样品经SDS-PAGE和光密度扫描分析表明其纯度约为95%左右,每100 ml培养菌可获得10 mg左右纯化的重组蛋白.结论 pET24b-Ag85B大肠杆菌工程菌株能高效表达rAg85B蛋白,大量纯化的rAg85B为其进一步的研究与应用奠定了基础.

关键词：蛋白 Ag85B 基因表达 克隆 分支杆菌、结核

所属期刊栏目：24

分类号：R51(传染病)

资助基金：总后勤部卫生部科研项目2002-12

在线出版日期：2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共2页

页码：487-488