枯草杆菌漆酶重要功能位点的保守性与可变性分析

摘要：

在对比分析天然枯草杆菌漆酶(CAR)的一级结构与三维空间结构的基础上,锁定了CAR的底物结合通道和铜离子结合位点,设计并构建了CAR的4种突变体.对比分析了野生型酶与4种突变体酶的性质及催化功能,结果表明,该漆酶分子中位于第二保守区的H155位点是漆酶催化所必需的,H155即使被其同义氨基酸(如Arg)替换,也会因氧化还原电势的降低而降低漆酶的催化活力,同时还会导致漆酶的热稳定性和酸碱稳定性降低,以及最适pH值酸移;位于非保守区的A158位点与I224位点的保守性对漆酶的催化是有利的,而S210G突变增强了漆酶的稳定性与催化功能,这可能与S210G突变增强了漆酶的底物通道上一段富含Pro片段的柔性有关.此外,A158/R155H突变(CAHE)可能导致漆酶不耐冷,在低温(＜50℃)时引起酶活明显降低.所研究的漆酶在2,2'-连氮·双(3-乙基苯并噻唑-6-磺酸)(ABTS)介体存在下,对靛蓝类染料(如靛蓝胭脂红)和三苯甲烷类染料(如结晶紫)的脱色率均高于对偶氮类染料(如甲基红和刚果红)和蒽醌类染料(如活性亮蓝),说明该漆酶对染料有一定的选择性.

关键词：漆酶、结构、催化、枯草芽孢杆菌

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分类号：O625.75;Q554(有机化学)

资助基金：吉林省科技厅计划项目20140101020JC;安徽大学现代生物制造协同创新中心开放课题批准号:BM2014001资助.Supported by the Jilin Provincial Science and Technology Department Program,China20140101020JC;the Project of Collaborative Innovation Center of Modem Bio-manufacture,Anhui University,ChinaBM2014001

在线出版日期：2016-09-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：1320-1327