乙型脑炎病毒EⅢ基因片段的表达与EⅢ-间接ELISA抗体检测试剂盒的研制

摘要：

为了研制乙型脑炎病毒E Ⅲ-间接ELISA抗体检测试剂盒,将乙型脑炎病毒EⅢ基因克隆至原核表达载体pET-32a(+),重组质粒转化大肠杆菌BL21进行诱导表达.以纯化后的重组蛋白EⅢ包被酶标板,优化ELISA反应条件,组装试剂盒.SDS-PAGE和Western bloting分析表明,重组蛋白分子质量约为30ku,经IPTG诱导后高效表达,且具有来良好的免疫原性.优化试验确定重组抗原最佳包被浓度为4.7 μg /mL,血清样本的阳性临界值为0.255.特异性试验结果表明,重组蛋白与猪瘟、猪伪狂犬、猪圆环病等多种病原体的阳性血清无交叉反应.敏感性试验结果表明,血清稀释至1∶6400时仍检测为阳性.该试剂盒的批内、批间变异系数均小于10％.用该试剂盒检测224份临床猪血清样本,并与商品化ELISA试剂盒检测结果比较,两者的符合率为90.7％.研究结果表明,原核表达的猪流行性乙型脑炎病毒EⅢ蛋白具有良好的免疫原性,研制的猪流行性乙型脑炎病毒E Ⅲ-间接ELISA抗体检测试剂盒敏感性、特异性和重复性较好,为猪流行性乙型脑炎的抗体水平检测、流行病学调查、类症鉴别等方面提供了重要方法.

关键词：猪流行性乙型脑炎病毒、原核表达、间接ELISA

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分类号：S852.65(动物医学（兽医学）)

资助基金：广东省科技计划项目2015B020230009,2015A050502044;国家重点研发计划重点专项2016YFD0500700;国家公益性行业农业科研专项201203056,201203082

在线出版日期：2016-12-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：12-16,39