哈维氏弧菌glyA基因的克隆及原核表达分析

摘要：

[目的]哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)是存在于海水中的正常菌群,但近几年大密度养殖使它成为海水鱼致病甚至死亡的原因之一.对哈维氏弧菌ZJ0603株中的glyA基因进行克隆及原核表达分析,以期为下一步研制亚单位疫苗奠定基础.[方法]应用PCR技术克隆哈维氏弧菌菌株ZJ0603的glyA基因,并对其编码的丝氨酸羟甲基转移酶(serine hydroxylmethyltransferase,SHMT)进行理化性质、信号肽、亚细胞定位及高级结构分析.将克隆获得的glyA基因与表达载体pET-28a连接构建重组质粒pET-28a-glyA,然后构建BL21-pET-28a-glyA重组菌株,测序后选取正确的菌株用IPTG诱导并对重组蛋白进行Western blot分析鉴定.对表达重组菌株BL21-pET-28a-glyA的表达条件进行优化以获得大量蛋白.[结果]生物信息学分析结果表明,glyA基因全长为1296 bp,共编码431个氨基酸,SHMT的理论等电点为6.18,不稳定系数为28.66,总平均亲水性为-0.200,整体表现为亲水且分布在细胞质中,预期蛋白分子量为46.60 ku.成功构建表达重组质粒pET-28a-glyA并转入表达菌株中,经IPTG诱导后进行Western blot分析,结果表明成功获得了SHMT重组蛋白.[结论]用控制变量法对表达条件优化后发现,IPTG最佳诱导时间、浓度以及温度分别为4 h、0.4 mmol/L和37℃.

关键词：哈维氏弧菌、glyA基因、克隆、原核表达、条件优化

所属期刊栏目：47

分类号：S941.4;Q786(水产保护学)

资助基金：广东省自然科学基金2017A030307033

在线出版日期：2020-08-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：84-90