椭圆叶花锚ISSR-PCR体系的建立与优化

摘要：

为建立椭圆叶花锚ISSR-PCR最佳反应体系,本研究采用正交设计和单因素试验的方法,对影响ISSR-PCR反应体系的5种关键因素(DNA,dNTPs,引物,Mg2+,Taq DNA酶)进行最适浓度筛选,并采用甘肃省的3个居群进行验证.结果 表明,各因素影响大小依次为:DNA浓度＞Mg2+＞dNTPs＞ Taq DNA酶＞引物浓度.椭圆叶花锚ISSR-PCR反应的最佳体系为(25 μL):50 ng DNA模板,Mg2+ 2.0 mmol/L,dNTPs 0.20 mmol/L,Taq酶1.5 U,引物0.4 μmol/L,2.5 μL 10×Buffer.选取甘肃省3个居群进行验证,结果显示扩增条带清晰明亮且重复性好,表明该反应体系适用于椭圆叶花锚的ISSR分子标记.该反应体系的建立可为椭圆叶花锚ISSR标记开发、遗传多样性、遗传图谱构建等后续分析提供参考.

关键词：椭圆叶花锚(Halenia elliptica)、ISSR-PCR、正交试验、单因素试验、体系优化

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资助基金：生态环境部生物多样性保护调查与评估2096001006

在线出版日期：2019-11-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：6410-6417