以nptⅡ为选择标记基因的TA克隆植物表达载体的构建

摘要：

TA克隆载体由于能够用于PCR产物的快速克隆,且操作简单,因此被广泛应用.本研究的目的在于构建一种可以直接连接PCR产物的TA克隆植物表达载体,其在植物细胞中表达的筛选基因为nptⅡ.首先我们向植物表达载体pRNAi-BKI1中引入包含2个XcmⅠ酶切位点的TA克隆位点序列,然后对pRNAi-BKI1载体原有的3个Xcm Ⅰ酶切位点逐一进行定点突变,最终获得了以nptⅡ为筛选基因的TA克隆植物表达载体,命名为pTO.用Xcm Ⅰ酶切pTO载体,得到两端含有T末端的线性载体,该线性载体可以直接与PCR产物连接.为了验证pTO载体的有效性,本研究利用PCR技术从pRI 201-AN-GUS载体上扩增GUS基因全长序列,将GUS基因连接到pTO载体上,构建出GUS基因的过表达载体pTO-GUS.将pTO-GUS导入根癌农杆菌EHA105,并进行烟草叶片转化.利用GUS组织染色法对侵染后的烟草叶片进行GUS瞬时表达分析,结果显示pTO-GUS上的GUS基因在烟草细胞中高效表达.本研究获得的pTO载体适合用于构建目的基因的过表达载体,可以直接连接PCR产物,节省载体构建的步骤和时间.

关键词：TA克隆载体、nptⅡ、定点突变,Xcm Ⅰ

所属期刊栏目：12

资助基金：国家自然科学基金31170635

在线出版日期：2014-04-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共10页

页码：363-372