一种KRAS基因突变检测方法的建立及初步应用

摘要：

目的建立一种KRAS基因实时荧光定量PCR-Sanger测序突变检测方法,并初步探讨其临床应用价值.方法以KRAS基因热点突变区域12、13密码子为研究位点设计特异性扩增、测序引物,利用已知野生型、突变型样品以TA克隆技术构建相应质粒作为标准品,建立KRAS基因实时荧光定量PCR-Sanger测序突变检测方法,并进行方法学和应用评估.结果成功构建了KRAS基因12、13密码子野生型、突变型质粒.建立了KRAS基因实时荧光定量PCR-Sanger测序突变检测方法,该方法灵敏度高(9.39×101 copies/uL),重复性好(实时荧光定量PCR部分批内、批间变异系数分别为1.60%、2.54%).该法与传统Sanger测序法同时检测40例临床样品,结果符合率为100%.结论本研究成功建立了可用于临床样品检测的KRAS基因实时荧光定量PCR-Sanger测序突变检测方法.

关键词：KRAS、突变、基因测序、实时荧光定量PCR

在线出版日期：2013-03-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

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