重组人OCIF结构域D1～D6基因在毕赤酵母中的表达

摘要：

利用PCR以实验室构建的原核重组表达质粒pProEX-OCIF为模板扩增得到N末端融合有6×His标签和rTEV蛋白酶识别序列的人破骨细胞形成抑制因子(Osteoclastogenesis Inhibitory Factor,简称OCIF)结构域D1～D6(简称OCIFm)编码基因片段;将其与pMD18-T连接,转化大肠杆菌TOP10,筛选得到阳性重组质粒pMD18-OCIFm,双酶切重组克隆质粒pMD18-OCIFm得到OCIFm基因片段;将其定向插入甲醇营养型酵母分泌表达载体pPIC9中,构建获得重组表达质粒pPIC9-OCIFm.测序验证后,以限制性内切酶SalⅠ线化,电穿孔转化酵母宿主菌GS115.筛选得到阳性表达菌株后,甲醇诱导表达4 d,SDS-PAGE和Western blot对表达情况进行分析和确认.所获得的OCIFm基因片段在甲醇营养型酵母中表达量占菌体总蛋白的30%以上.利用Ni-NTA树脂对表达产物进行一步亲和层析纯化.活性测定表明纯化的表达产物可诱导体外培养的成熟破骨细胞样细胞的凋亡.表达产物的生物学活性较利用原核表达系统明显提高.

关键词：破骨细胞形成抑制因子、Pichia表达系统、细胞凋亡

所属期刊栏目：20

分类号：Q75(分子遗传学)

资助基金：国家自然科学基金30000078;国家高技术研究发展计划863计划2001AA215441

在线出版日期：2005-01-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：11-18