UNcle高通量蛋白稳定系统分析3种反转录酶

摘要：

目的:反转录酶的热稳定性是重要的质控参数,利用UNcle高通量蛋白稳定分析仪多种检测功能对反转录酶热稳定性进行表征.方法:比较qRT-PCR方法及UNcle系统对3种反转录酶的热稳定检测,并利用UNcle荧光光谱分析核苷类反转录酶抑制剂去羟肌苷对反转录酶的影响.结果:利用高通量蛋白稳定性分析系统UNcle进行反转录酶熔解温度Tm、聚集起始温度Tagg及蛋白均一度分析.和qRT-PCR检测结果相比,3种反转录酶的热稳定性顺序一致,但各自检测的Tm数值差距较大.比较这两种方法的前处理,UNcle不需要外源添加染料,即没有引入外来变量直接检测,可以更加准确反映反转录酶本身的Tm值.结论:提供了一种新的快速准确表征反转录酶热稳定性的方法,为反转录酶的研发质控提供重要检测依据,并为UNcle在其他蛋白的热稳定分析提供借鉴参考意义.

关键词：反转录酶、蛋白热稳定性、核苷类逆转录酶抑制剂、去羟肌苷

分类号：R512.91;Q939;TP311

资助基金：中国科学院仪器设备功能开发技术创新项目292019000090

在线出版日期：2022-05-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：64-72