基于可断裂三功能探针的酪氨酸磷酸化蛋白质复合物的规模化分析

摘要：

在细胞的信号转导过程中,磷酸化酪氨酸(Phosphotyrosine,pTyr)信号在许多通路中起着重要的调控作用.受pTyr信号调控的蛋白质复合物是信号传递早期过程中的关键分子机器,分析该类动态蛋白质复合物具有重要的意义.Photo-pTyr-scaffold是一种结合了化学探针与pTyr识别蛋白质结构域的化学蛋白质组学分析策略,采用该策略已经实现了对表皮生长因子受体(Epidermal growth factor receptor,EGFR)通路相关的pTyr信号蛋白质复合物的规模化分析.但是,该方法无法解析所鉴定复合物的一一对应关系,增加了后续复合物解析的复杂性.本研究在Photo-pTyr-scaffold探针设计的基础上,将可断裂基团引入至其生物素富集端,设计合成了新型的可断裂三功能探针,以实现对富集产物的可控洗脱.基于pTyr信号蛋白质复合物在化学交联后的分子量差异,利用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳实现了对洗脱的pTyr蛋白质复合物的分离,进一步将不同分子量区域的蛋白质进行胶内酶解和质谱分析.理论上,发生化学交联的pTyr蛋白质复合物将在高于原蛋白质分子量的区域被鉴定到.利用此策略,本研究系统研究了EGFR信号通路的pTyr信号蛋白质复合物,得到了20种重要蛋白质的分子量迁移图谱,从图谱中筛选出具有明显迁移现象的2种信号蛋白质(泛素连接酶CBL和脚手架蛋白SHC1),进一步采用蛋白免疫印迹法验证了其迁移现象,证明了本方法用于解析pTyr信号蛋白质复合物的可行性.

关键词：酪氨酸磷酸化、蛋白质复合物、表皮生长因子受体信号通路、蛋白质组学分析

所属期刊栏目：51

分类号：R73;S881.2+6;R329.2

资助基金：国家自然科学基金;国家自然科学基金

在线出版日期：2023-06-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共10页

页码：492-501