基于核酸适配体夹心结构介导酶切引发环介导等温信号放大的超灵敏凝血酶比色传感方法研究

摘要：

设计了一种双核酸适配体夹心识别凝血酶并通过酶切开启环介导等温扩增实现信号放大的高灵敏凝血酶比色传感方法.在凝血酶存在下,利用双核酸适配体构建三明治夹心结构识别并捕获凝血酶,通过Nb.BsrDI切刻内切酶的酶切作用引发环介导等温扩增实现信号放大,使G-四链体-血红素DNA酶催化ABTS-H2 O2体系显示特征绿色.在最优实验条件下,本方法检测凝血酶的线性范围为0.01～1.0 ag/mL,检出限为0.008 ag/mL,回归方程为ΔA420 nm=0.187Cthrombin+0.171(R2=0.991),具有超高的灵敏度和良好的线性度.在血清样品中存在大量干扰蛋白时,传感器对凝血酶仍然具有较高的选择性.将本方法应用于人血清样品中凝血酶含量检测,加标回收率为96.1％ ～103.2％.本方法将核酸适配体夹心识别技术、环介导等温扩增技术和G-四链体-血红素DNA酶酶促信号放大技术相结合,实现了凝血酶的超灵敏检测;同时,本方法具有操作简便、稳定性好且成本低的优点,可望应用于临床人血清中凝血酶的高灵敏检测.

关键词：凝血酶、环介导等温扩增、G-四链体-血红素DNA酶、比色分析

所属期刊栏目：50

分类号：O657.3;S852.65;X703.1

资助基金：国家自然科学基金;湖南省自然科学基金

在线出版日期：2022-07-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共10页

页码：1022-1031