石油烃厌氧降解基因masD和bamA实时荧光定量PCR方法的建立及应用

摘要：

masD和bamA基因分别是烷烃和芳烃厌氧降解的关键基因.本研究建立了这两种基因的SYBR Green I实时荧光定量PCR检测方法.通过参考相关石油烃厌氧降解菌株的GenBank序列,利用Primer express软件设计烷烃和芳烃厌氧降解基因的扩增引物masD-f、masD-r和bamA-f、bamA-r.经过常规PCR扩增分别得到片段大小为389和354 bp扩增产物,经测序并在NCBI数据库查询,确定为masD和bamA片段.通过实时荧光定量PCR构建测定这两种基因的标准曲线.优化后的扩增体系(25μL)为:12.5μL 2×Trans Start Top Green qPCR Super Mix,引物浓度为0.2μmol/L,masD和bamA基因最适退火温度分别为52℃ 和56℃.建立的两种基因的实时荧光定量PCR检测方法具有非常好的重复性,其灵敏度比传统PCR技术高100倍.对于氧化石墨烯促进石油烃的厌氧降解体系中厌氧基因的定量检测显示,添加不同浓度的石墨烯均促进了bamA拷贝数的增加,但对masD的拷贝数无显著影响.

关键词：石油烃、厌氧降解基因、masD基因、bamA基因、实时荧光定量聚合酶链式反应

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资助基金：国家自然科学基金项目.41473070,U1806216;天津市科技计划项目.16YFXTSF00520,17ZXSTSF00050,17PTGCCX00240;CNPC科技发展计划2016D-4610;高等学校学科创新引智计划111计划T2017002

在线出版日期：2019-03-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：207-213