孔雀石绿单克隆抗体制备和酶联免疫检测方法的建立

摘要：

针对孔雀石绿三苯环特征结构,设计合成1种高质量半抗原。通过偶联载体蛋白、动物免疫和细胞融合,制备出一株高质量的单克隆抗体MG-DA4-C7,亚类为IgG1,轻链为κ型。通过对包被原浓度、抗体浓度、二抗浓度的优化,建立了孔雀石绿间接竞争酶联免疫分析方法。方法半抑制浓度( IC50)为0.96μg/L,线性检测范围(IC20~C80)为0.1~8.1μg/L,LOD(IC10)为0.05μg/L,回归方程y=-0.3274lgx+0.4698(R2=0.9891)。本方法特异性高,与代谢物隐孔雀石绿交叉反应小于0.1％,与结晶紫、灿烂绿交叉反应率分别为18.1％和26.5％；实际样品添加回收率为87.3％~107.3％。本方法测定结果经HPLC-MS/MS方法确证,二者相关系数达0.999。本方法可用于鱼类等水产品中孔雀石绿残留的实际检测。

关键词：孔雀石绿、半抗原、单克隆抗体、抗原识别、酶联免疫分析

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分类号：S85;R39

资助基金：国家自然科学基金31371769;广东省科技计划项目.2014A020219008,2013B040402006,2016A040403077;广东省自然科学基金项目Nos.2013030013338,2014A030306026项目资助。

在线出版日期：2016-10-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：1385-1393