全血改进线性指数聚合酶链式反应用于焦磷酸测序检测基因多态性

摘要：

焦磷酸测序是目前基因多态性检测的主要方法之一,但是其前期的样本制备工作较为繁琐,限制了其在临床检测中的应用。为了简化焦磷酸测序的流程,本研究根据不对称PCR原理,改进了线性指数聚合酶链式反应( LATE_PCR)的引物设计方法,增加过量引物的长度和浓度,并结合全血直接扩增技术,建立了基于普通rTaq聚合酶和高pH 缓冲液( HpH Buffer)的全血改进LATE_PCR( Improved LATE_PCR, imLATE_PCR)方法。考察了方法的最优扩增体系、血液抗凝剂对其影响以及全血模板量。采用单管、一步法直接扩增出单链测序模板,成功地对24例临床血样的乙醇脱氢酶基因多态性进行了检测,检测结果可用于指导临床个体化用药。24例样本的基因型分别为ADH1B位点AA纯合6例、AG杂合14例、GG纯合4例； ADH1C位点GG纯合20例、AG杂合4例、AA纯合0例。

关键词：全血直接扩增、线性指数聚合酶链式反应、焦磷酸测序、基因多态性、酒精代谢

分类号：R73;R97

资助基金：江苏省科技支撑计划社会发展项目BE2012744;中国博士后科学基金特别资助项目2013T60962;南京军区南京总医院院内课题2013053;江苏省青蓝工程资助

在线出版日期：2015-01-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：55-62