全血直接扩增结合焦磷酸测序法测定亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性
亚甲基四氢叶酸还原酶基因677C>T和1298A>C两个位点的多态性与临床常用抗肿瘤药物甲氨喋呤及氟尿嘧啶的作用密切相关,对这两个位点多态性的检测能指导临床合理用药.为进一步缩短检测时间,降低检测成本,本研究建立了基于全血直接PCR的焦测序检测方法,采用“HpH Buffer”直接扩增全血模板,仅需1 μL全血样本即可对两个位点进行高效扩增.扩增产物经碱变性法制备单链模板后进行焦磷酸测序,经过条件优化,仅需5μL扩增产物和1 μL微球即可完成高灵敏的焦测序反应.为验证方法的准确性,检测了12例临床样本,均能正确检测两个位点的基因多态性.本研究为临床基因多态性检测提供了一种操作简便,耗时短,成本低,准确度高的方法,本方法可用于指导甲氨喋呤和5-氟尿嘧啶的个体化用药.
亚甲基四氢叶酸还原酶基因、基因分型、全血直接扩增、焦磷酸测序
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R4 ;R45
国家自然科学基金面上项目20975113;江苏省科技支撑计划社会发展BE2010604
2012-09-29(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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1037-1042