超高效液相色谱-串联质谱法同时测定肿瘤细胞mRNA中12种正常核苷和修饰核苷

摘要：

建立了一种肿瘤细胞mRNA中12种正常核苷和修饰核苷的分析方法.肿瘤细胞样品经总RNA提取、mRNA纯化和mRNA水解后,加入8-溴鸟苷(8Br-G)为内标,以0.1％甲酸水溶液和0.1％甲酸甲醇溶液为流动相,采用Agilent RRHD SB-C18 (2.1 mm ×50 mm,1.8μm)色谱柱进行分离,电喷雾电离源正离子扫描(ESI+),多反应监测(M RM)模式检测.该方法符合方法学验证要求,12种正常核苷和修饰核苷在一定浓度范围内线性关系良好,相关系数(r)均大于0.99,定量下限(LOQ)为0.17～3.13 ng/mL,检出限(LOD)为0.08～ 1.56 ng/mL.将建立的方法应用于人鼻咽癌5-8F细胞系、人官颈癌Hela细胞系和人胚肾上皮293T细胞系,成功地检测出多种修饰核苷水平.该方法细胞用量少(每样品2×106个),分析时间短(每样品6 min),灵敏度高,可为癌症研究和临床诊断等提供一种有效的分析方法.

关键词：核苷、修饰核苷、mRNA、肿瘤细胞、超高效液相色谱-串联质谱法(UPLC-MS/MS)

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分类号：O657.63;Q525(分析化学)

资助基金：Project on the Integration of Industry,Education and Research of Guangdong Province2012B091100371

在线出版日期：2020-09-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共11页

页码：950-960