PEI介导的E1A基因对结肠癌细胞放疗增敏效应的研究
以自行合成的聚乙烯亚胺纳米凝胶(Polyethylenimine,PEI)为载体转染E1A基因,观察E1A基凶对结肠癌细胞体外生长的抑制作用和对电离辐射的增敏效应,并初步探讨其作用机理.经PEI介导将真核细胞高效表达E1A基因的重组质粒psv-E1A导入人结肠癌细胞系SW480,RT-PCR证实其转染,G418筛选出阳性克隆细胞.通过测绘生长曲线,观察E1A基因对该细胞系生长的抑制作用.流式细胞术检测转染前后SW480细胞的细胞周期分布变化.用噻唑蓝(Methylthiazolyl ltetrazolium,MTT)法测定电离辐射对SW480转染E1A基凶前后的效应.用Western-blot方法测定结肠癌细胞SW480转染质粒psv-E1A前后HER-2蛋白表达量的变化.(1)G418筛选出阳性克隆细胞.(2)RT-PCR结果显示PEI能转染质粒psv-E1A并有稳定的表达.(3)流式细胞仪测细胞周期,与SW480细胞相比,SW480-E1A细胞S期呈下降趋势(p<0.001):G2/M期增加显著(p<0.001):G1期细胞无明显变化(p>0.05).(4)MTT法测量SW480细胞及SW480-E1A细胞不同时间的吸光度值,可见转染EIA基因细胞群体生长缓慢.(5)转染E1A基因后,SW480-E1A细胞对电离辐射的敏感性显著提高(p<0.001).(6)E1A基因明显降低结肠癌细胞中HER-2蛋白的表达量.PEI能转染质粒psv-E1A,E1A基因能够明显抑制结肠癌细胞的生长,并明显提高其对放射线的敏感性.
E1A基因、基因转染、结肠癌细胞、聚乙烯亚胺、放疗
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R737.31;R730.54;R730.231;R735.3(肿瘤学)
国家自然科学基金30870741;江苏省自然科学基金BK2007245;江苏省卫生厅科技兴卫项目资助
2015-06-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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