siRNA干扰人胃癌细胞系IGFBP2表达的实验研究

摘要：

目的:利用慢病毒包装系统构建IGFBP2基因靶向的表达载体,转染到胃癌细胞株SGC-7901中,检测该细胞中基因表达的沉默效果,同时初步观察基因表达抑制后对细胞生物学行为的影响.方法:用反转录聚合酶链式反应检测各组细胞系中m-RNA(IGFBP2,IGF和IGFR)表达,同时利用western blot技术检测干扰前后IGFBP2、IGF和IGFR的蛋白表达水平,最后用MTT方法检测细胞转染前后的增殖情况.结果:①初步筛选得到27个候选片段,对这些候选序列通过同源序列检索和进一步优选,最终确定5'target 564-582位(ggttgcaga-caatggcgat)5'target923-943位(gcctgtacaacctcaaacagt)为靶序列,并选择一无关对照的发卡样DNA序列.②成功构建重组子PLL3.7 1,PLL3.7 2和PLL3.7 Con,利用酶切筛选和测序验证,分析其序列与设计完全一致.③转导48h后用荧光显微镜观察胃癌细胞可看见大量eGFP表达,经筛选转染细胞得到siRNA稳定表达的细胞系.④转染IGFBP2靶向siRNA(PLL3.7 1,PLL3.7 2)SGC-7901细胞,IGFBP2基因的表达水平明显降低,RNA水平上IGFBP2有73.9%的下调,在蛋白水平上有约77.8%的下调;转染无关siRNA(PLL3.7 Con)的SGC-7901细胞,IGFBP2 mRNA表达水平不降低.⑤从细胞增殖实验结果看,转染后的细胞生长比未转染的细胞要快.结论:①成功地构建出针对IGFBP2的siRNA表达载体PLL3.71,PLL3.72和无关siRNA表达载体PLL3.72Con,靶向siRNA表达载体转染胃癌细胞SGC-7901后能显著降低细胞中的IGFBP2表达.②通过siRNA沉默降低IGFBP2的表达后,将促进肿瘤细胞SGC-7901的生长.

关键词：胃癌、小干扰RNA、IGFBP2、慢病毒载体

所属期刊栏目：23

分类号：R73;TS2

资助基金：安徽省教育厅自然科学项目

在线出版日期：2010-05-04（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：48-53