人UbcH10及其siRNA真核表达载体的构建与表达

摘要：

目的:构建以人泛素结合酶UbcH10基因为基础的真核表达质粒pcDNA3.1(UbcH10)及其siRNA表达载体pGPU6/GFP/Neo(siRNA-UbcH10),并在结肠癌细胞LOVO中表达与鉴定.方法:提取组织总RNA,通过RT-PCR扩增出UbcH10基因,克隆到真核表达载体pcDNA3.1的多克隆位点中,构建UbcH10的真核表达载体.通过siRNA设计软件选取ubcH10基因的siRNA片段合成构建表达载体pGPU6/GFP/Neo(siPdYA-UbcH10).然后采用脂质体转染法将其分别转染LOVO细胞,用RT-PCR在RNA水平和Western Blot在蛋白水平检测其在真核细胞中的表达.结果:测序结果显示克隆UbcH10基因片段序列完全正确;重组质粒转染LO-VO细胞后,检测到pcDNA3.1(UbcH10)转染组UbcH10表达增强,而pGPU6/GFP/Neo(siRNA-UbcH10)转染组UbcH10表达减弱.结论:成功构建真核表达质粒pcDNA3.1(UbeH10)及其siRNA表达载体pGPU6/GFP/Neo(siRNA-UbcH10),并在真核细胞中能有效表达,为今后进一步研究UbcH10的功能和作用机制奠定了基础.

关键词：UbcH10、真核表达、siRNA

所属期刊栏目：22

分类号：R68;R73

在线出版日期：2009-10-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：397-399