人血管内皮生长因子的克隆表达及免疫学检测工作标准品的制备

摘要：

目的:克隆表达人血管内皮生长因子165(human vascular endothelial growth factor 165,hVEGF165)基因,制备VEGF免疫学检测工作标准品.方法:用RT-PCR从肝癌组织扩增目的基因VEGF165,插入到pUCm-T质粒中并测序鉴定.构建原核表达重组质粒pET32a-hVEGF165,转化入大肠杆菌,经IPTG诱导,固化Ni2+吸收色谱纯化得到重组人VEGF165(recombinant human VEGF165,rhVEGF165).用Wstern Blot检测rhVEGF165免疫原性,并通过HUVEC增殖试验检测rhVEGF165生物学活性.按标准品的要求制备VEGF检测工作标准品,最后用ELASA试剂盒标定.结果:PCR产物为600bp,测序结果表明其序列正确,人VEGF165可在大肠杆菌内可溶性表达,rhVEGF165蛋白相对分子质量为38kD,具有生物学活性.工作标准品浓度标定为5.05pmol/L.结论:成功地克隆了有生物学活性的VEGF165基因,并制备出VEGF免疫学检测工作标准品.

关键词：血管内皮生长因子、克隆、工作标准品

所属期刊栏目：17

分类号：R73;R32

资助基金：上海市科委资助项目02DJ04137

在线出版日期：2004-12-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：395-398