甘薯羽状斑驳病毒和甘薯褪绿矮化病毒检测方法的建立

摘要：

为了建立甘薯羽状斑驳病毒(Sweet potato feathery mottle virus,SPFMV)和甘薯矮化褪绿病毒(Sweet potato chlorotic stunt virus,SPCSV)的逆转录环介导等温扩增(RT-LAMP)检测方法,提高检测灵敏度,实现结果的可视化.根据SPFMV外壳蛋白基因(CP)的核苷酸序列和SPCSV的热休克蛋白基因(Hsp 70)的核苷酸序列设计4条RT-LAMP特异性引物,采取单因素优化试验,对RT-LAMP反应体系中的多个因素包括时间、温度、BST聚合酶、Mg2+、RNase抑制剂、dNTPs和Betaine浓度优化,恒温扩增60 min.经琼脂糖凝胶电泳分析,SYBR Green Ⅰ可视化显色,结果表明:SPFMV的优化反应体系为:FIP/BIP 2 μL、F3/B3 0.5 μL、BST 聚合酶 1.0 μL、dNTPs 0.6 μL、MgSO4 1.5 μL、RNase 抑制剂 1.0 μL、Betaine 7 μL,62℃ 60 min.SPCSV的优化反应体系为:FIP/BIP 2μL、F3/B3 0.5μL、BST聚合酶1.0μL、dNTPs 0.6 μL、MgSO4 1.5 μL、RNase 抑制剂 1.2 μL、Betaine 7 μL,64℃ 60 min.进一步利用SPFMV 全基因组的 4 个片段(SPFMV-1、SPFMV-2、SPFMV-3、SPFMV-4)、SPCSV-Hsp 70和RGNNV进行特异性检验,分别建立了 SPFMV和SPCSV的特异性RT-LAMP检测方法,扩增出了具有RT-LAMP的典型瀑布状条带,与凝胶电泳和SYBR Green Ⅰ显色结果一致,SPFMV和SPCSV的灵敏度检测下限分别为:1×10-6、1×10-3 ng·μL-1,该方法检测灵敏度高,实现了结果的可视化.对田间甘薯苗和离体组织培养甘薯苗进行检测验证,SPFMV-RT-LAMP检测方法成功率为100％,SPCSV-RT-LAMP检测方法的成功率为95％,表明研发的SPFMV和SPCSV的RT-LAMP检测方法适用于SPFMV和SPCSV的快速检测.

关键词：甘薯、甘薯羽状斑驳病毒(SPFMV)、甘薯矮化褪绿病毒(SPCSV)、环介导等温扩增技术(RT-LAMP)、建立

所属期刊栏目：54

分类号：S435.31(病虫害及其防治)

资助基金：福建省科技计划项目;福建省科技计划项目

在线出版日期：2023-10-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共11页

页码：11-21