巨桉miR156 CRISPR/Cas9载体构建

摘要：

通过CRISPR/Cas9系统构建miR156家族中3个基因编辑载体(miR156A、miR156B和miR156C),为研究巨桉miR156家族基因的功能提供借鉴与参考.经聚合酶链式反应(PCR)扩增含靶基因的miR156A-gRNA、miR156B-gRNA和miR156C-gRNA,用BsaI酶切得到线性化的pHDE/Cas9载体后,经重组酶连接得到重组质粒.将重组质粒转化到DH5α感受态细胞,再对重组质粒进行PCR鉴定与测序比对分析.结果表明,利用同源重组的方法构建了带有筛选标记基因mcherry的巨桉miR156家族CRISPR/Cas9载体系统,插入序列无突变,与预期序列高度一致,重组子阳性率为100％.

关键词：CRISPR/Cas9、同源重组、载体构建、基因编辑

所属期刊栏目：38

分类号：Q782(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家自然科学基金项目31470677;广东省自然科学基金项目2015A030313560,2017A030307017;广东科技计划项目2017A030303087;广东高校果蔬加工与贮藏工程技术开发中心项目2012gczxB001;广东省攀登计划项目pdjhb0343

在线出版日期：2018-11-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：488-493