靶向乳酸脱氢酶A(LDHA)对T细胞急性淋巴细胞白血病具有抗白血病作用
背景 与目的T细胞急性淋巴细胞白血病(T-cell acute lymphoblastic leukemia,T-ALL)是急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL)中少见且具侵袭性的一种亚型.在T-ALL患者的血清中,乳酸脱氢酶A(lactate dehydrogenase A,LDHA)的活性增高.我们推测靶向LDHA可以作为改善T-ALL患者预后的一个潜在治疗策略.本研究旨在研究LDHA靶向治疗对T-ALL的抗白血病作用及其潜在的分子机制.方法 用LDH抑制剂草氨酸盐处理原代T-ALL细胞系Jurkat和DU528.采用MTT、克隆形成、凋亡及细胞周期检测分析草氨酸盐对T-ALL细胞的作用.采用定量实时PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)和Western blotting检测相关的信号通路.采用活性氧自由基(reactive oxygen species,ROS)检测试剂盒检测分析草氨酸盐处理后的T-ALL细胞中的ROS产量.用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建了LDHA基因敲减的T-ALL转基因斑马鱼模型,采用TUNEL、Western blotting及T-ALL肿瘤进展检测分析LDHA基因敲减对T-ALL转基因斑马鱼模型的影响.结果 草氨酸盐显著抑制了Jurkat和DU528的细胞增殖,诱导了细胞凋亡,同时也引起了Jurkat和DU528细胞周期G0/G1期阻滞,刺激了ROS的生成(P<0.001).阻断LDHA显著减低了c-Myc基因及蛋白的表达,也降低了磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinositol 3'-kinase,PI3K)信号通路上的磷酸化丝氨酸/苏氨酸激酶(phos-phorylated serine/threonine kinase,AKT)和糖原合成酶激酶3β(glycogen synthase kinase 3 beta,GSK-3β)的表达.在T-ALL转基因斑马鱼中,LDHA基因敲减减缓了疾病进展,下调了c-Myc的mRNA和蛋白表达.结论 靶向LDHA对T-ALL表现出抗白血病的作用,可作为一种对T-ALL的潜在的治疗策略.
CRISPR/Cas9基因编辑、LDHA、草氨酸盐、T细胞淋巴细胞白血病、转基因斑马鱼模型
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感谢同济医学院附属同济医院的Jianfeng Zhou在斑马鱼敲减技术;感谢湖南师范大学的Yun Deng的帮助;感谢哈佛医学院Dana-Farber癌症研究所的A;Thomas Look博士慷慨赠予的T-ALL转基因斑马鱼;本研究得到了国家自然科学基金;湖南省自然科学基金
2021-05-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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