人源噬菌体抗体对Peroxiredoxin I高表达肺腺癌细胞增殖的抑制作用
背景与目的:研究表明过氧化物酶Peroxiredoxin I(Ph I)与癌症的发展有密切关系.我们已通过噬菌体展示技术构建了肺腺癌相关的人源单链抗体库.本研究对该库进行筛选,得到抗Prx I肺腺癌单链抗体,并检测其对肺腺癌细胞A549增殖的抑制作用.方法:PCR法检测TG1中scFv基因插入率,1%琼脂糖凝胶电泳鉴定Sfi I和Not I双酶切质粒的结果,以A549细胞及在肺癌中高表达的抗氧化蛋白Prx I为靶抗原分别对抗体库进行3轮筛选富集.将阳性克隆用IPTG诱导表达并进行检测.放射性核素计数法测定细胞单链抗体内摄水平,MTT法及流式细胞术检测单链抗体对A549细胞的增殖抑制和凋亡情况,免疫印迹法检测抗体作用A549细胞后Prx I的表达水平.结果:seFv基因插入率为77%,双酶切鉴定检测到目的条带.在亲和筛选过程中,肺腺癌单链抗体得到富集,收获率逐轮提高,第6轮为第1轮的180倍.ELISA法检测到在随机选取的10个克隆中,有6个与A549细胞呈阳性反应,阳性率60%.SDS-PAGE及ELISA检测证实得到人源抗Prx I肺腺癌单链抗体.被A549细胞内摄的单链抗体介导了细胞的凋亡以及细胞内Prx I蛋白表达水平的下降.结论:从噬菌体抗体库中筛选获得具有较高特异性的抗Prx I肺腺癌单链抗体.单链抗体与肺腺癌细胞有特异性亲和力,并能有效抑制其增殖.
肺腺癌、噬菌体抗体库、单链抗体、Peroxiredoxin、I、增殖抑制
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R734.2;Q78(肿瘤学)
国家自然科学基金项目30370422
2013-09-04（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共6页
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