5-氮杂脱氧胞苷对肝癌细胞HepG2中抑癌基因FHIT表达的影响

摘要：

背景与目的:肝癌细胞中由于FHIT基因过度甲基化而导致其表达降低.本实验应用甲基化酶抑制剂5-氮杂脱氧胞苷(5-Aza-2'deoxycytidine,5-Aza-dC)作用肝癌细胞株HepG2,观察用药后肝癌细胞中FHIT mRNA和蛋白表达的变化,并观察5-Aza-dC对细胞增殖的影响.方法:以5-Aza-dC作用HepG2细胞,采用甲基化特异性聚合酶链反应(methylation-specific polymerase chain reaction,MSP)检测HepG2细胞中FHIT甲基化变化;采用RT-PCR检测FHIT mRNA的表达;采用细胞免疫组织化学染色和Western blot方法检测FHIT蛋白表达,MTT法检测HepG2细胞增殖情况.结果:5-Aza-dC处理前,HepG2细胞FHIT基凶呈甲基化状态,mRNA及蛋白表达缺失;经5-Aza-dC作用后,MSP显示HepG2细胞FHIT基因甲基化逆转;经1.0 μmol/L、2.0 μmol/L及4.0 μmol/L的5-Aza-dC作用48 h后,FHIT基因mRNA扩增出产物的吸光度值分别为0.80±0.32、1.41±0.54和1.51±0.61,Western blot检测产物积分灰度值分别为0.33±0.20、1.00±0.26和1.12±0.38:当药物浓度达到1.0μmol/L时出现了对HepG2细胞增殖的抑制作用.结论:5-Aza-dC能明显逆转HepG2细胞的FHIT基因异常甲基化,激活因高甲基化所致基因沉默的再转录,诱导该基因的表达;同时抑制细胞增殖.

关键词：5-氮杂脱氧胞苷、肝肿瘤、FHIT基因、甲基化、甲基化特异性聚合酶链式反应

所属期刊栏目：28

分类号：R734.1(肿瘤学)

在线出版日期：2013-09-04（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：967-971