抗人DR5功能性抗体mDRA-6诱导人白血病Jurkat细胞凋亡的机制

摘要：

背景与目的:肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL)及其死亡受体的功能性单克隆抗体具有杀伤肿瘤细胞的活性.我们研制了抗人死亡受体5(death receptor,DR5)功能性单克隆抗体(mDRA-6),本研究对其诱导Jurkat细胞凋亡的Caspase分子机制进行初步探讨.方法:mDRA-6作用后,琼脂糖凝胶电泳检测Jurkat细胞的DNA ladder;MTT法检测细胞存活情况;Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术定量分析细胞凋亡情况;观察Caspase-10、-9、-8、-3等的抑制剂对mDRA-6诱导细胞凋亡的抑制作用;免疫印迹技术检测凋亡信号蛋白caspase-10、-9、-8、-3,多聚ADP核糖聚合酶(poly ADP-ribose polymerase,PARP)、BH3相关结构域死亡激动剂(BH3 interacting domain death agonist,Bid)、短缩的Bid(truncated Bid.tBid)、细胞色素C(cytochrome c,Cyto C)等活化裂解的情况.结果:琼脂糖凝胶电泳显示DNA呈现明显梯状带型;mDRA-6对Jurkat细胞具有明显的诱导凋亡作用且呈量.效关系.2.0μg/mL mDRA-6作用Jurkat细胞0.25h、0.5h、1h、2h,其凋亡率分别为16.2%、28.3%、69.2%、78.2%;Caspase-8抑制剂能明显抑制mDRA-6诱导的细胞凋亡.抑制率为77.9%,Caspase-3和Caspase-9抑制剂作用的抑制率分别为54.2%、8.7%,而Caspase-10的抑制剂无抑制作用;免疫印迹技术检测显示Caspase-8、-3、-9均呈现随时间延长酶原逐渐减少、活化片段增加的现象,PARP的降解片段亦增加,Bid激活降解为tbid.Cyto C大量释放,而Caspase-10酶原无明显改变、无活化片段出现.结论:mDRA-6诱导Jurkat细胞凋亡主要是通过激活Caspase路径和线粒体路径来完成的.

关键词：死亡受体5、单克隆抗体、Jurkat细胞、细胞凋亡、Caspase

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分类号：R392.5

资助基金：国家自然科学基金项目30571697;河南省杰出人才创新基金项目074200510014

在线出版日期：2013-09-04（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：136-142