靶向GPR48的shRNA抑制人宫颈癌HeLa细胞的侵袭转移

摘要：

背景与目的:GPR48受体偶联Gs蛋白介导细胞内信号转导通路,通过调节微管聚合状态和基质金属蛋白酶活性,影响肿瘤细胞的侵袭转移.本研究探讨靶向GPR48的短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)对人宫颈癌细胞株HeLa体外侵袭能力及在体转移能力的影响.方法:以人GPR48 mRNA编码区中两条不同序列作为RNA干扰靶点,构建靶向GPR48的shRNA真核表达质粒,同时构建不针对任何已知mRNA的阴性shRNA真核表达质粒,分别转染至HeLa细胞.新霉索抗性筛选稳定表达siRNA的转化克隆.采用RT-PCR和Western blot检测GPR48的表达变化.通过Boyden小室实验以穿过人工基底膜的细胞数量评估HeLa细胞体外侵袭能力的变化;分别将转染和未转染GPR48 shRNA的HeLa细胞接种于裸鼠皮下,观察肿瘤生长情况及肺部转移情况.结果:RNA干扰使HeLa细胞GPR48表达下调80%;与阴性对照组比较,转染靶向GPR48重组质粒的实验组穿膜细胞数显著减少(28.3±1.5和17.6±1.5 vs.94.4±15.7,P<0.01).裸鼠在体肺转移实验中,与阴性对照组比较,转染靶向GPR48重组质粒的实验组肺转移结节数显著减少(1.3±0.2和1.5±0.4 vs.7.8±1.8,P<0.01).结论:shRNA真核表达载体能明显抑制HeLa细胞的GPR48表达.有效抑制HeLa细胞的体外侵袭和在体转移.

关键词：短发夹状RNA、GPR48、宫颈肿瘤、HeLa细胞、侵袭、转移、裸鼠

所属期刊栏目：28

分类号：R730.54(肿瘤学)

资助基金：国家自然科学基金

在线出版日期：2013-09-04（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：126-130