T-bet对小鼠巨噬细胞(Raw264.7)生物学功能的影响

摘要：

背景与目的:T-bet(T box expressed in T cells)是一种特异性调控Th1淋巴细胞的核转录因子,它广泛调控多种免疫细胞(如Th1、NK、CD8+、DC、B细胞等)的生物学活性.本研究观察转染小鼠T-bet基因(pcDNA3.0-mT-bet)对小鼠巨噬细胞Raw264.7生物学功能的影响.方法:构建含T-bet的真核表达载体pcDNA3.0-mT-bet,通过双酶切鉴定及测序、PCR鉴定其准确性,RT-PCR及Western blot检测其在Raw264.7细胞中的表达.以PBS、pcDNA3.0空载体作为对照,将其瞬时转染入Raw264.7细胞,48 h后观察其对细胞周期、细胞表面分子MHC Ⅰ/Ⅱ表达的影响,以及对FITC-右旋糖酐(FITC-dextran)的吞噬能力、一氧化氮(nitric oxide,NO)分泌水平及T-bet对小鼠白血病细胞L1210的杀伤活性.结果:载体pcDNA3.0-mT-bet构建成功并在Raw264.7细胞中表达;T-bet对Raw264.7细胞周期没有影响(P＞0.05);经T-bet修饰后,细胞表面MHC Ⅰ类分子的表达(24.8±0.6)高于空载体组(20.8±0.7),有统计学意义(P＜0.05);但两组间MHCⅡ类分子的表达无显著性差异(P＞0.05).T-bet修饰组吞噬Dextran的平均荧光强度(32.8±0.8)高于空载体组(28.2±0.4),有统计学意义(P＜0.05).在无脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激时,T-bet组NO的产生量[(1.7±0.6)pmol]高于空载体组,两组相比差异有显著性(P＜0.05);经10 μg/ml LPS持续刺激20 h后,T-bet组NO的产生量[(15.6±±1.6)pmol]显著高于空载体组[(10.5±1.3)pmol](P＜0.05).pcDNA3.0-mT-bet对L1210细胞的体外杀伤活性[(51.9±3.5)%]明显高于空载体组[(35.6±2.1)%],差异有显著性(P＜0.05).结论:T-bet可诱导Raw264.7细胞表达MHC Ⅰ类分子,增强其对Dextran的吞噬能力,促进其分泌NO,增加其对L1210细胞的杀伤活性,但对其细胞周期及MHCⅡ类分子的表达无影响.

关键词：T-bet、小鼠巨噬细胞、杀伤活性、一氧化氮、MHCⅠ、MHCⅡ

所属期刊栏目：25

分类号：R730.51(肿瘤学)

在线出版日期：2006-10-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：1069-1075