体外连接法构建重组人γ干扰素腺病毒并检测其在真核细胞中的表达

摘要：

背景与目的:γ干扰素(interferon-γ,IFNγ)具有直接促进某些肿瘤细胞凋亡和调节细胞免疫的功能,因此在肿瘤的基因治疗中IFNγ将发挥重要的作用.本研究构建携带人IFNγ cDNA的重组腺病毒,并检测它在真核细胞中的表达.方法:用逆转录聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RTPCR)从人外周血单个核细胞中扩增出IFNγ的cDNA全长序列,插入腺病毒穿梭质粒pShuttle,经酶切和DNA测序鉴定,然后用体外连接法构建重组腺病毒Ad-IFNγ.用所构建的重组Ad-IFNγ感染HepG2细胞,通过RT-PCR和免疫组织化学法检测IFNγ的表达.结果:经测序,克隆的人IFNγcDNA序列与GenBank上公布的序列完全一致;Ad-IFNγ感染的HepG2细胞在转录和翻译水平均有IFNγ的表达.结论:体外连接法是一种简便易行的重组腺病毒载体构建方法;所构建的重组腺病毒Ad-IFNγ能表达IFNγ蛋白,可用于抗肿瘤和抗病毒等细胞及动物实验.

关键词：肿瘤、基因治疗、IFNγ、体外连接法、腺病毒载体、表达

所属期刊栏目：25

分类号：R373.1(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：广东省医学科研项目B2002050;国家研究发展基金2004CB518801;广东省科技厅科研项目2003A10902

在线出版日期：2006-07-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：771-774