阻断肝再生增强因子的表达对人肝癌细胞株HepG2增殖的抑制作用

摘要：

背景与目的:前期研究中已发现人肝再生增强因子(human augmenter of liver regeneration,hALR)在肝癌细胞中呈高表达,在正常肝细胞中几乎不表达,并在体外能刺激肝癌细胞株增殖,而对正常肝细胞无影响.本研究通过运用hALR的siRNA和hALR单克隆抗体阻断人肝癌细胞株HepG2表达,探讨hALR对细胞增殖的影响.方法:设计、构建siRNA表达质粒pSIALR-A及其阴性对照质粒pSIALR-B.将构建的pSIALR-A和pSIALR-B分别转染HepG2细胞.荧光显微镜观察绿色荧光蛋白的表达,以计算转染效率.转染48 h后,免疫细胞化学及RT-PCR法检测HepG2细胞中hALR的表达.用3H-TdR掺入法检测hALR的siRNA和特异性单克隆抗体对HepG2细胞增殖的影响.结果:HepG2细胞中有hALR的表达.成功构建了针对hALR基因编码区的siRNA表达质粒pSIALR-A.转染入细胞后发现,pSIALR-A能明显抑制hALR的表达(mRNA的表达量减少83%),而随机序列的siRNA却无此作用.hALR的siRNA在体外能显著抑制人肝癌细胞株HepG2增殖,分别转染质粒pSIALR-A和pSIALR-B后HepG2细胞的cpm值为67 687±6 548和104 807±5 713(P＜0.05).抗hALR单克隆抗体特异性地阻断hALR的作用后,可部分抑制肿瘤细胞自主性生长(P＜0.05).结论:HepG2细胞高表达hALR;针对hALR的siRNA能显著、特异性地抑制hALR表达,进而抑制HepG2细胞的生长.抗hALR单克隆抗体也能部分抑制HepG2细胞自主性生长.

关键词：人肝再生增强因子、siRNA、肝肿瘤、单克隆抗体、HepG2细胞株、细胞增殖

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分类号：R392;R575

资助基金：国家高技术研究发展计划863计划30570826;重庆市科委资助项目2001-38;重庆市自然科学基金2004-54

在线出版日期：2006-07-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：671-676