人乳腺癌OX40L转基因细胞株的构建及其对T细胞的共刺激作用

摘要：

背景与目的:共刺激分子OX40(CD134)和OX40配体(OX40L、CD134L)分属TNFR、TNF家族,OX40-OX40L信号能促进细胞因子的产生及提高抗原特异性记忆T细胞的数量,发挥重要的免疫调节作用.本实验旨在构建稳定表达OX40配体(OX40L)的人乳腺癌转基因细胞株,进而研究OX40-OX40L信号对T细胞体外活化和功能的调节作用.方法:运用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术从人成熟树突细胞(dendritic cell,DC)获得全长人OX40L基因,构建真核表达载体pcDNA3.1-OX40L转染人乳腺癌细胞株MDA-MB-435;经过G418抗性筛选和亚克隆,获得稳定表达OX40L的转基因细胞,并经RT-PCR和免疫荧光标记确证靶分子的表达;采用MTF、酶联免疫吸附试验(ELISA)和免疫荧光标记等方法分析转基因细胞对T细胞的增殖、IL-2、IL-4、IFN-γ的分泌和T细胞上Fas分子表达的影响.结果:成功地获得稳定表达人OX40L分子的人乳腺癌MDA-MB-435转基因细胞株,该细胞株可有效地促进T细胞增殖,促进T细胞分泌IL-2和IFN-γ,在第7天,T细胞、T细胞+M435、T细胞+M435-mock、T细胞+M435-OX40L各组IL-2的浓度依次为:315 ng/ml、322 ng/ml、586 ng/ml、973.4ng/ml;IFN-γ浓度依次为:(2 518±117.6)pg/ml、(2 490±124.2)pg/ml、(2 695±134.5)pg/ml、(3 755±187.75)pg/ml,该基因转染细胞同时还能下调T细胞上Fas分子的表达[(68.3±5.6)%,P＜0.05].结论:稳定表达人OX40L的乳腺癌转基因细胞在体外能有效地活化T细胞,介导其增殖、分泌细胞因子及抑制T细胞活化诱导的细胞死亡.

关键词：乳肿肿瘤、MDA-MB-435细胞株、OX40L转基因细胞、T细胞、免疫调节

所属期刊栏目：25

分类号：R392.11

资助基金：科技部科研项目2001CB510003

在线出版日期：2006-04-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：148-152