利用报道基因检测鼻咽癌细胞的RNA干扰作用

摘要：

背景与目的:RNA干扰(RNA interference,RNAi)具有高效特异阻断基因表达的特点,在基因功能研究、信号转导通路的研究以及基因治疗中得到很广泛的应用.本实验通过体外转录合成siRNA和构建表达shRNA的质粒载体两种方法,检测鼻咽癌细胞系的RNAi作用,建立一个较完善的RNAi技术平台.方法:体外转录合成或通过pSUPER.retro构建表达针对GFP和荧光素酶的siRNAs或shRNAs,将它们和报道基因一起瞬时转染HeLa、CNE1、CNE2和5-8F细胞,用荧光显微镜和Western blot检测GFP表达情况;用荧光素酶检测系统分析荧光素酶的活性.结果:3'末端带UU突出的siGFP2和psGFP能特异性地抑制细胞中GFP的表达,而单链反义RNA和3'末端不带UU突出的siGFP1无此作用.定量荧光素酶活性分析发现,siLuc能抑制HeLa、CNE1、CNE2和5-8F细胞中荧光素酶的表达,其抑制率分别达到91.43%,78.01%,90.30%和62.85%.HeLa细胞瞬时转染psLuc后,荧光素酶的表达抑制率可达到78.22%.结论:体外转录合成的siRNA和表达shRNA的质粒均能诱发RNAi效应.3'UU突出末端在siRNA诱发的RNAi中起作用.鼻咽癌细胞与HeLa细胞一样存在RNAi效应.

关键词：鼻咽肿瘤、RNA干扰、绿色荧光蛋白、荧光素酶

所属期刊栏目：24

分类号：R739.63(肿瘤学)

资助基金：国家自然科学基金30200140

在线出版日期：2005-04-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：371-375