细菌氧化还原蛋白azurin选择性诱导人骨肉瘤U2OS细胞凋亡

摘要：

背景与目的:已有研究表明细菌氧化还原蛋白azurin,在体外和荷瘤裸鼠体内可选择性的抑制某些黑色素瘤细胞和人乳腺癌细胞增殖并诱导和激发肿瘤细胞的凋亡,同时发现azurin在荷瘤裸鼠体内诱导肿瘤凋亡使肿瘤体积明显减小,但未发现毒副作用.azurin如何诱导肿瘤细胞凋亡从而达到治疗肿瘤的机制目前仍不明确.本研究旨在探讨azurin对人骨肉瘤U2OS细胞诱导凋亡作用及其可能的分子机制.方法:以不同浓度的azurin培养U2OS细胞.通过MTT法测细胞活性,用Bliss法计算IC50值,荧光显微镜、电镜观察亚细胞结构和凋亡小体形成,琼脂糖凝胶电泳观察DNA"ladder"形成,流式细胞仪检测细胞凋亡发生率,Western blot检测细胞Bax、Bcl-2和caspase-3表达情况.结果:细菌氧化还原蛋白azurin能选择性抑制人骨肉瘤U2OS细胞生长且呈浓度依赖关系并能诱导细胞凋亡,IC50值为(114.54±7.65)mg/L,均高于相同浓度组的人骨肉瘤细胞MG63及正常人肝细胞L-02细胞组(P＜0.05).100 mg/L和200 mg/L azurin作用24 h后,AO、Hoechst 33258和透射电镜见较多的凋亡细胞,出现凋亡小体,部分细胞坏死.琼脂糖凝胶电泳见典型的"ladder",Annexin-V/PI的FCM检测azurin作用3 h就出现凋亡现象,200 mg/L的azurin作用48 h时凋亡指数达到峰值35.8%,细胞停滞于G1期,而对照组则无明显的凋亡细胞出现;Western blot发现azurin的浓度增加后,细胞Bax表达升高,caspase-3裂解激活,而Bcl-2蛋白表达逐渐降低.结论:Aazurin可选择性诱导人骨肉瘤U2OS细胞的凋亡,且存在明显的时效量效关系.其分子机制可能是通过下调Bcl-2的表达和上调Bax蛋白表达,激活caspase-3进而通过一系列凋亡级连反应而实现的.

关键词：Azurin、骨肉瘤、凋亡、Bax、Bcl-2、Caspase-3

所属期刊栏目：24

分类号：R738.1(肿瘤学)

资助基金：浙江省卫生厅资助项目2003ZD007;浙江省自然科学基金Y204358

在线出版日期：2005-04-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：298-304