甲基化特异多聚酶链反应的改进及应用

摘要：

背景与目的:甲基化特异多聚酶链反应( methylation-specific-PCR, MSP)已经成为筛查 DNA甲基化异常的最常用方法之一,但其方法繁琐、耗时、非特异性产物多和不经济,有待改进.RUNX3基因是胃癌的抑癌基因,失活的主要机制之一为 DNA高甲基化,本研究目的在于用改进的 MSP检测肝细胞癌 RUNX3基因的甲基化状态.方法:采用玻璃奶回收化学修饰后的 DNA,应用专用于 GC丰富序列扩增的 GC-Melt试剂以改良 MSP并对 152例肝细胞癌 RUNX3基因的甲基化状态进行检测,并与常规 MSP方法进行比较.结果:常规 MSP方法纯化和回收 DNA需要昂贵的纯化柱和高速低温离心机以及 16 h以上的纯化和回收时间;而在改良方法中,玻璃奶回收化学修饰后的 DNA不需昂贵的纯化柱和高速低温离心机,纯化和回收过程只需 1 h.专用于扩增 GC丰富序列的 GC-Melt溶液较常规方法明显减少 PCR的非特异性产物.51.9%( 79/152)的肝细胞癌 RUNX3基因呈现高甲基化状态.结论: 改良的甲基化特异的 PCR技术是筛查 DNA甲基化高效、简便的方法.甲基化机制可能是肝细胞癌 RUNX3基因失活的重要机制之一.

关键词：肝肿瘤、甲基化特异多聚酶链反应、RUNX3基因

所属期刊栏目：23

分类号：R73-34(肿瘤学)

在线出版日期：2004-12-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：1354-1356