RNA干涉抑制宫颈癌 CaSki细胞株 HPV16 E6基因的研究

摘要：

背景与目的:研究表明宫颈癌的发生发展与人乳头瘤病毒 (human papilloma virus,HPV)E6、 E7癌基因密切相关,于是人们采用核酶或 HPV E6、 E7反义寡核苷酸抑制其表达来治疗宫颈癌,虽然取得了一定的效果,但仍面临基因抑制效率低、维持时间短、工作量大、耗费多等问题.本研究采用最新的 RNA干扰技术干扰宫颈癌 CaSki细胞中 HPV16 E6转录,以了解其能否特异性抑制 HPV16 E6基因及其时效性如何.方法:设计合成针对 HPV16 E6的荧光标记 siRNA,借脂质体转染宫颈癌 CaSki细胞,通过荧光照片计数荧光细胞占所有细胞的比例计算转染效率;测定转染后不同时间点的细胞凋亡率; RT PCR 测定 HPV16 E6 mRNA变化, Western blot和流式细胞仪检测转染前后蛋白表达情况. 结果:相差显微镜荧光照片显示细胞转染的效率为 81%. HPV16 E6 siRNA转染细胞后 24 h、 48 h、 5天凋亡率分别为 7.7%、 11.8%和 37.4%,转染 9天时凋亡率下降至 12.6%. RT-PCR 扩增结果显示,细胞转染前HPV16 E6 mRNA 的量与 siRNA阴性对照比较没有显著性差异,但转染后 24 h、48 h、5天和 9天分别减少了 77%、83%、59%和 41%;而作为内对照的β-actin mRNA在转染前后无变化.流式细胞仪定量测定 HPV16 E6蛋白,结果显示转染后 24 h、 48h和 5天,蛋白表达抑制率分别为 79.7%、 80.4%和 71.3%; 9天时抑制率有下降,但仍可达 57.4%.此结果与 HPV16 E6 Western blot结果相吻合.以 Lamin A/C作为内对照,不同的时间点 Lamin A/C蛋白表达均无差异.结论:宫颈癌 CaSki细胞中确实有 RNA干扰现象存在,对外源性的 HPV16病毒 E6基因的干扰具有基因特异性和高效性.

关键词：RNA干扰、HPV16 E6、宫颈肿瘤、CaSki细胞

所属期刊栏目：23

分类号：R737.33(肿瘤学)

资助基金：国家自然科学基金30371483

在线出版日期：2004-12-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：1257-1262