内质网滞留型抗Ⅳ型胶原酶胞内抗体对肿瘤细胞侵袭和增殖的抑制作用

摘要：

背景与目的:侵袭转移是恶性肿瘤细胞的重要特性,Ⅳ型胶原酶(包括基质金属蛋白酶 2和基质金属蛋白酶 9)在恶性肿瘤转移扩散中发挥着极其重要的作用.我们通过胞内抗体技术,阻断Ⅳ型胶原酶的分泌,以期达到抑制恶性肿瘤细胞侵袭转移的效果.方法:构建编码可在内质网滞留的抗Ⅳ型胶原酶单链抗体的表达载体 pcDNA3.1 ER.scFv,并转染入人巨细胞肺癌 PG细胞系内. Western blot 检测 pcDNA3.1 ER.scFv的表达,免疫共沉淀实验分析胞内抗体 ER.scFv在 PG细胞内与靶蛋白相互作用情况,明胶酶谱检测Ⅳ型胶原酶的分泌,以及体外侵袭和增殖实验.结果: ER.scFv在 PG细胞内表达,而且能够识别和结合靶蛋白基质金属蛋白酶 9.通过胞内抗体的基因转染,显著抑制了Ⅳ型胶原酶的功能和活性. ER.scFv转染的 PG细胞较野生型和空白质粒组,侵袭能力明显降低,抑制率为 76.3%( P< 0.05),在 Matrigel上进行细胞培养, ER.scFv对 PG细胞有明显的抗增殖效果.结论:内质网滞留型胞内抗体技术可以在蛋白加工、分泌这一关键通路中抑制肿瘤细胞Ⅳ型胶原酶的活性,进而抑制了肿瘤侵袭和增殖,在肿瘤基因治疗中具有应用前景.

关键词：Ⅳ型胶原酶、胞内抗体、肿瘤侵袭、增殖、基因治疗

所属期刊栏目：23

分类号：Q78;R735.7(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家自然科学基金39970288;国家重点基础研究发展计划973计划G1998051212

在线出版日期：2004-10-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：1005-1010