三氧化二砷诱导U266细胞p16基因重新表达

摘要：

背景与目的:DNA甲基化调节基因表达,且与肿瘤发生相关,干扰抑癌基因甲基化可能成为防治肿瘤的新途径.细胞内砷代谢和DNA甲基化都需要S-腺苷蛋氨酸作为甲基供体.本文拟探讨三氧化二砷(arsenic trioxide,As2O3)诱导因高甲基化失活的抑癌基因p16重新表达的可能性及其机制.方法:以p16基因高甲基化失活的人骨髓瘤细胞系U266为研究对象,经不同浓度As2O3处理后,采用限制性内切酶HpaⅡ及其同裂酶Msp Ⅰ结合PCR技术,检测基因组DNA及p16基因甲基化状态;RT-PCR技术检测p16基因和DNA甲基转移酶(DNA methyltransferases,DNMTs)mRNA表达;Western blot技术检测P16蛋白表达.结果:(1)U266细胞具有p16基因高甲基化并失表达的特点,即基因组DNA经Msp Ⅰ酶切后电泳呈"涂抹"现象,而经HpaⅡ酶切后与未经酶切的DNA一样均呈单一条带;经Msp Ⅰ酶切后的DNA不能经PCR扩增出p16基因产物,而HpaⅡ酶切后的DNA与未经酶切的DNA一样均能扩增出340 bp的p16基因产物;RT-PCR法检测U266细胞无p16 mRNA产物,Westernblot检测也未见P16蛋白带.(2)0.5～2.0 μmol/L As2O3处理后的U266细胞DNA经HpaⅡ酶切后电泳呈"涂抹"现象,也不再能扩增出p16基因产物.1.0 μmol/L和2.0 μmol/LAs2O3处理的U266细胞还扩增出p16基因mRNA产物;Western blot也检测到P16蛋白带.(3)As2O3处理后U266细胞DNMT3A和DNMT3B mRNA表达均增高,且表达水平随As2O3浓度增加而升高,但各组间无显著性差异(P＞0.05).结论:As2O3可通过去甲基化作用诱导U266细胞p16基因重新表达.

关键词：DNA甲基化、三氧化二砷、p16、人骨髓瘤细胞系U266

所属期刊栏目：23

分类号：R73-36;R733.3(肿瘤学)

资助基金：国家自然科学基金30070324

在线出版日期：2004-07-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：626-630