RNA干扰技术靶向hTERT基因治疗肝癌的实验研究

摘要：

背景与目的:RNA干扰(RNA interference,RNAi)是由双链RNA介导的、在转录后mRNA水平关闭相应基因表达的新基因阻断技术,在基因功能研究、基因治疗方面已显示出巨大的前景.目前,利用RNAi已抑制了包括cyclophilin、GAPDH、p53、c-myc在内的多个内源基因的表达.同时在艾滋病、病毒性肝炎等的治疗研究中也已取得一定进展.但对肝癌等恶性肿瘤中高表达的hTERT基因,国内外还未见相关研究报道.本研究利用RNAi技术,在体内外抑制hTERT基因表达,探讨RNAi对肝癌治疗的可行性.方法:设计干扰hTERT基因的小片段RNA,构建重组表达质粒pTZU6+1-shRNA-hTERT并导入肝癌SMMC7721细胞株和裸鼠移植瘤,在体内外诱导RNAi,采用流式细胞检测技术、RT-PCR法、免疫组化等同时检测RNAi治疗组和对照组hTERT基因表达及细胞增殖变化.结果:体外细胞实验显示,重组质粒pTZU6+1-shRNA-hTERT导入肝癌SMMC7721细胞株3～7天后,肝癌细胞生长抑制率达37.5%;细胞周期相分布发生显著变化,S期细胞明显减少,G1/G0期细胞显著增加;hTERT的mRNA表达由99.4%下调到53.1%,hTERT蛋白表达由86.3%下调到46.6%.裸鼠体内实验结果显示,质粒pTZU6+1-shRNA-hTERT注射裸鼠皮下移植瘤7天后,瘤体积明显缩小,hTERT的mRNA表达由99.1%下调到76.2%,hTERT蛋白表达由87.2%下调到61.8%.体内、外对照组各指标均无变化.结论:RNAi明显抑制了靶基因hTERT的表达及肝癌细胞增殖,是潜在的肿瘤治疗新方法.

关键词：肝肿瘤、RNA干扰、hTERT、基因治疗、可行性、特异性

所属期刊栏目：23

分类号：R737.9(肿瘤学)

在线出版日期：2004-07-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：619-625