带免疫佐剂CEA基因疫苗的构建及其稳定同步表达的研究

摘要：

背景与目的:基因疫苗是目前肿瘤免疫基因治疗研究的热点.目前癌胚抗原阳性肿瘤的治疗效果不佳,本研究拟利用质粒pVAX1构建带有免疫佐剂白细胞介素2同步表达的癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)基因疫苗,探讨一种新的肿瘤生物治疗方法.方法:利用RT-PCR从患者肿瘤组织中钓取CEA目的基因cDNA;运用分子克隆技术,通过内部核糖体进入位点(IRES),将CEA cDNA和hIL-2cDNA连接于质粒pVAX1中,采用化学发光免疫法和ELISA双抗体夹心法分别检测CEA抗原和hIL-2因子的表达;同时用蛋白质分析软件分析和预测目的抗原的特性.结果:测序结果证实本实验所构建的重组质粒插入DNA序列无错配,质粒上所接入的CEA cDNA与GenBank公布的M29540和M17303的序列99.8%同源,经蛋白质分析软件预测,其抗原性、跨膜结构片段、信号肽位点和二、三级结构特征与同源癌胚抗原基本一致.hIL-2 cDNA与母本序列100%同源.检测结果说明该重组质粒在体外CHO细胞株中可同步表达CEA和hlL-2分子.结论:从肿瘤组织中成功地获取了CEA cDNA,所构建的pVCEA2重组质粒能在体外细胞中同步表达CEA和IL-2蛋白分子,这为进一步体内实验研究基因治疗CEA阳性肿瘤提供了新的可能途径.

关键词：癌胚抗原、基因疫苗、安全性质粒、内部核糖体进入位点、白细胞介素2

所属期刊栏目：23

分类号：R730.2(肿瘤学)

资助基金：广东省科技厅科技计划N0.2002C30305;广西科技攻关项目0235024-23

在线出版日期：2004-06-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：282-287